دستورالعمل ساخت بافر TBE (تریس، بوریک اسید و EDTA) 10x و 1x

معرفی بافر TBE

TBE یا Tris/Borat/EDTA برای الکتروفورز اسیدهای نوکلئیک در توالی یابی ژل های PAA یا ژل های آگارز استفاده می شود.
در زیست‌شناسی مولکولی، بافرهای TBE و TAE اغلب در روش‌هایی که شامل اسیدهای نوکلئیک می‌شوند استفاده می‌شوند که رایج‌ترین آنها الکتروفورز است.

محلول های تریس اسید بافرهای موثری برای ایجاد شرایطی هستند که DNA را دپروتونه و محلول در آب نگه می دارند. EDTA کی لیت دهنده کاتیون های دو ظرفیتی، به ویژه منیزیم (Mg2 +) است. از آنجایی که این یون ها برای بسیاری از آنزیم ها، از جمله نوکلئازهای آلاینده، فاکتورهای کمکی ضروری هستند، نقش EDTA محافظت از اسیدهای نوکلئیک در برابر تجزیه آنزیمی است. اما از آنجایی که Mg2+ برای بسیاری از آنزیم‌های مفید اصلاح‌کننده DNA مانند آنزیم‌های محدودکننده و DNA پلیمرازها نقش کوفاکتور (همسازه) است، غلظت آن در بافرهای TBE یا TAE معمولاً پایین نگه داشته می‌شود (معمولاً در حدود 1 میلی‌مولار).

دستورالعمل ساخت بافر TBE

• برای بافر 10x TBE

1. 108 گرم تریس و 55 گرم اسید بوریک را در 900 میلی لیتر آب مقطر حل کنید.
2. 40 میلی لیتر Na2EDTA 0.5 مولار (pH 8.0) اضافه کنید (به طور متناوب از 9.3 گرم Na2EDTA استفاده کنید)
3. حجم را روی 1 لیتر تنظیم کنید.
4. در دمای اتاق نگهداری شود.

توجه: بافر 10x TBE ممکن است کمی طول بکشد تا حل شود، حتی با هم زدن سریع

• برای بافر 1X TBE

1. 10.8 گرم تریس و 5.5 گرم اسید بوریک را در 900 میلی لیتر آب مقطر حل کنید.
2. مقدار 4 میلی لیتر Na2EDTA 0.5 مولار (pH 8.0) اضافه کنید
3. حجم را روی 1 لیتر تنظیم کنید.
4. در دمای اتاق نگهداری شود.

چگونه مقدار 4 میلی لیتر 0.5 مولار از EDTA را تهیه کنیم ؟ این مطلب را مشاهده کنید